氯吡格雷对急性脑梗死患者体内生物钟基因的表达规律影响（要求一定要有统计报表 ）
篇幅字符：2900
交稿时间：4天

 一、 项目概述（120字）
脑梗死是局部脑组织区域血液供应障碍导致的脑组织缺血缺氧性病变坏死，临床上表现为神经功能缺失表现。氯吡格雷是临床常用抗血小板聚集药物，对脑梗死的治疗有确切疗效。本项目研究氯吡格雷对急性脑梗死患者体内生物钟基因的表达规律，以期发现氯吡格雷对脑梗死患者体内生物节律的影响机制。
二、项目研究的目的、意义
氯吡格雷对脑梗死治疗具有良好的临床效果，其作用机制早已阐明。但是脑梗死多在休息或睡眠中发病，这就预示着生物节律对疾病的发生和治疗是比较重要的。本研究着眼于氯吡格雷对急性脑梗死患者体内生物钟基因per，cry，clock和bmal的表达规律影响，以期发现生物节律在脑梗死治疗和康复中的角色，对脑梗死患者的治疗和康复都有重要的指导意义。
三、项目主要研究内容及技术指标
1．非药物干预时，急性脑梗死患者体内生物钟基因的表达规律。主要研究急性脑梗死患者未使用氯吡格雷时血液中生物钟基因per，cry，clock和bmal的表达规律。
2. 氯吡格雷干预后，急性脑梗死患者体内生物钟基因的表达规律的影响。主要研究氯吡格雷对急性脑梗死患者血液中生物钟基因per，cry，clock和bmal的表达影响。
四、国内外同类研究现状和发展趋势
已有研究证实，同其他治疗药物比较，阿司匹林、氯吡格雷对脑梗死患者具有较好的疗效及安全性。但是，氯吡格雷治疗效果在不同患者呈现很大的差异，所以关于基因多态性对氯吡格雷的疗效影响的研究很多。如研究P2Y12基因、CYP2C19基因、A561C基因、磷酸二酯酶4D基因、ABCB1、和MTAP等基因多态性对氯吡格雷治疗和脑梗死发病的相关研究已经广泛展开。其他对染色体的多态性分析也开展的非常广泛，如对染色体9p21在不同患者中多态性的研究。临床研究表明，急性脑梗死患者多在睡眠中发病，但是关于相关调控基因表达规律的研究在国内外开展的较少。
生物钟是生物对地球上以24小时为周期的自然因子，如光暗循环，长期适应而演化的内在计时机制。生物借助生物钟预测外界环境的变化并且协调相应的生理功能和行为。许多生理功能呈现以24小时为周期的生物节律。地球自转产生光照、温度等自然因子以24小时为周期的昼夜变化。各种动物包括人类对地球周期性环境的长期适应，而演化出一种内在的计时机制，称为生物钟（Circadian  clocks）。生物钟赋予生物预测外界环境的变化进而协调自身的生命活动的能力。生物钟调控可以在分子、生化、细胞、生理和行为等水平上发生，对各种基本生命过程，包括行为、内分泌等各种生理功能以及睡眠、生殖、代谢和免疫等均发挥不可或缺的调节作用，从而对生命健康起到重要的影响。有研究表明,生物钟紊乱能够严重损害机体的健康。目前我们对生物钟分子调节机制的认识,主要来自于对果蝇(Drosophila melanogaster)和小鼠(Mus musculus)等模式生物的大量分子遗传研究。而对人类生物钟的研究相对开展的比较缓慢。脑梗死多在睡眠中发病，因此我们认为睡眠同脑梗死是息息相关的，而睡眠与生物钟的作用非常密切，所以探索生物钟在脑梗死患者体内的作用机制非常必要。
目前，主要的生物钟基因（per，cry，clock和bmal）已经完全克隆，相关功能的研究已经成熟，但是在特定病人体内的表达规律还是有待研究。
五、研究（制）方法和技术路线（工艺、流程）
研究方法
1、入选病例
入选病例标准：①符合1995年全国第四次脑血管病学术会议制定的诊断标准，经头颅CT或MRI证实的脑梗死；②首次发病，病程≤7天；③NIHSS评分≤5分，未行溶栓治疗；④年龄≥50周岁；⑤神志清楚，生命体征平稳；⑥签署知情同意书。
2、生物钟基因Q-PCR引物的合成及鉴定
通过NCBI-BLAST程序获得人类per，cry，clock和bmal的引物信息，并经人类基因组扩增，获得正确的目的片段，以此检验Q-PCR引物合成的有效性。
3、人血液mRNA的提取
将新鲜血样，加入trisol后，超声破碎，用试剂盒提取。
4、人血液cDNA的获得
将上一步获得的mRNA用反转试剂盒反转为cDNA.
5、Q-PCR研究表达规律
    采用定量PCR仪器，对上述cDNA进行定量分析。试剂为SYBR green体系。